Restriktionsdigestion åstadkommes genom inkubation av mål-DNA-molekylen med restriktions enzymer - enzymer som känner igen och binder specifika DNA-sekvenser och klyver vid specifika nukleotider antingen inom igenkänningssekvensen eller utanför av igenkänningssekvensen.
Hur smälter restriktionsenzymer?
Restriction Enzyme Digest Protocol
- Lägg till komponenter i ett rent rör i den ordning som visas: …
- Inkubera reaktionen vid uppslutningstemperatur (vanligtvis 37 °C) i 1 timme.
- Stoppa rötningen genom värmeinaktivering (65 °C i 15 minuter) eller tillsats av 10 mM slutkoncentration EDTA.
Smälter restriktionsenzym DNA?
Restriktionsenzymer kan också användas för att generera kompatibla ändar på PCR-produkter. … I alla fall används ett eller flera restriktionsenzymer för att smälta det DNA som resulterar i antingen icke-riktad eller riktad insättning i den kompatibla plasmiden.
Hur fungerar DNA-restriktionsenzymer?
Hur fungerar restriktionsenzymer? Liksom alla enzymer fungerar ett restriktionsenzym genom form-till-form-matchning När det kommer i kontakt med en DNA-sekvens med en form som matchar en del av enzymet, som kallas igenkänningsstället, den lindar sig runt DNA:t och orsakar brott i båda strängarna av DNA-molekylen.
Vilket enzym smälter DNA?
Dessa enzymer kallas restriktionsendonukleaser eller restriktionsenzymer, och de kan klyva DNA-molekyler vid de positioner där särskilda korta sekvenser av baser finns närvarande.
