Om ditt protein inte har samma storlek som din antikropp kan du eluera med 0,1M glycin, pH2-3 och sedan separera proteinet av intresse från antikroppen med hjälp av SEC (som superdex 200).
Vad eluerar ett protein?
Proteinerna elueras av en gradient av ökande mängder av ett organiskt lösningsmedel, såsom acetonitril. Proteinerna eluerar enligt deras hydrofobicitet. Efter rening med HPLC är proteinet i en lösning som endast innehåller flyktiga föreningar och som lätt kan lyofiliseras.
Varför har proteiner en låg pH-eluering?
Användningen av låg pH-buffert för eluering från protein A är känd för att bidra till produktaggregation Ändå tyder en mer begränsad uppsättning bevis på att lågt pH kanske inte är det enda orsak till aggregering i protein A-kromatografi, snarare kan andra aspekter av processen bidra väsentligt.
Hur går elueringen till?
Inom analytisk och organisk kemi är eluering processen att extrahera ett material från ett annat genom att tvätta med ett lösningsmedel; som vid tvättning av laddade jonbytarhartser för att avlägsna infångade joner. … Efter att lösningsmedelsmolekylerna har förskjutit analyten, kan analyten tas ut ur kolonnen för analys.
Hur många antikroppar behöver du för Coip?
För rutinmässiga Co-IP-experiment är antikroppen jag använde inte mer än 2ug (I min uppsättning är 1,4 -2,0 ug antikropp tillräckligt för att fånga upp 2500-5000 ug av proteinlysat.) Men det är fortfarande beroende av uttrycksnivåerna för dina målproteiner i dina prover, så du måste förmodligen göra några ändringar.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
